logo

Методы анализа.

Качественное определение.

Для обнаружения флавоноидов в ЛРС используют химические реакции и хроматографию. Химические реакции подразделяются на цветные и реакции осаждения.

1.Цветные реакции.

1.Цианидиновая проба.

Общей реакцией на флавоноидные соединения является цианидиновая проба, проводимая с помощью концентрированной соляной кислоты и металлического магния. Действие водорода в момент выделения приводит к восстановлению карбонильной группы и образованию ненасыщенного пиранового цикла, который под действием соляной кислоты превращается в оксониевое соединение, имеющее окраску от оранжевой (флавоны) до красно-фиолетовой (флаваноны, флавонолы, флаванонолы).

Изменение условий восстановления путем замены магния на цинк приводит к изменению окраски. При использовании цинка по­ложительную реакцию дают флавонолы и флавонол-3-гликозиды, а флаваноны не обнаруживают ее.

Цианидиновую реакцию не обнаруживают халконы, ауроны, но при добавлении концентрированной соляной кислоты (без маг­ния) образуют красное окрашивание за счет образования оксониевых солей [6].

Для постановки реакции 1 г порошка сырья заливают 10 мл 95% этанола, нагревают на водяной бане до кипения и настаивают 3-4 ч. Спиртовое извлечение фильтруют, упаривают до объема 2 мл, делят пополам и разливают в 2 пробирки; в каждую пробирку прибавляют по 3 капли концентрированной хлористоводородной кислоты. В 1-ю пробирку добавляют 0,03-0,05 г цинковой пыли и нагревают на водяной бане до кипения. Жидкость окрашивается в красный цвет. Во 2-й пробирке окрашивание отсутствует [7].

ЦИАНИДИНХЛОРИД

2. Борно-лимонная реакция (реакция Вильсона- Таубека).

5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодействуя с борной ки­слотой в присутствии лимонной (реактив Вильсона), образуют жел­тую окраску с красноватой флюоресценцией в УФ-свете. При замене лимонной кислоты на щавелевую (реактив Таубека) в УФ-свете отме­чается зеленая или желтая флюоресценция.

3. Реакция с треххлористой сурьмой.

5-оксифлавоны и 5-оксифлавонолы, взаимодействуя с треххлори­стой сурьмой, образуют комплексные соединения, окрашенные в жел­тый или желто-оранжевый цвет - флавоны, в красный или красно-фиолетовый - халконы.

4

. Характерной реакцией на флавоноиды является их взаимодей­ствие со щелочами

с образованием желтой окраски. Халконы и ау­роны дают со щелочами красное или ярко-желтое окрашивание, антоцианидины-синее окрашивание.

5.

Флавоноиды со свободной 7-оксигруппой легко образуют азо-красители с диазотированной сулъфаниловой кислотой и другими производными ароматических аминов

[6]. Появление тотчас же оранжево-красной окраски в видимом свете указывает на присутствие 7-оксифлавонов, 7-оксифлавонолов, 7-оксиизофлавонов. Появление окраски через 1-2 минуты, подтверждает наличие 7-оксифлавононов [5].

6.

Ряд флавоноидов дает окрашенные комплексы с ионами алю­миния, циркония,

окрашенные, как правило, в УФ-свете в ярко-желтый цвет, что используется при их хроматографическом обнару­жении.

7.

Как все фенольные соединения, флавоноиды взаимодействуют с хлоридом окисного железа

с образованием различно окрашенных комплексов (от зеленого до коричневого). Реакция мало специфична [6].

2. Реакции осаждения.

Все флавоноиды с основным ацетатом свинца образуют осадки, окрашенные в ярко-жёлтый или красный цвет.

Средним ацетатом свинца осаждаются лишь флавоноид, содержащие свободные орто-гидроксильные группы в 3’4’-положениях кольца В [2].

3. Хроматография.

Для обнаружения флавоноидов в растительном материале широко используется бумажная и тонкослойная хроматография. Флавоноиды идеально подходят для хроматографического анализа благодаря их различной растворимости, сорбционной способности, а также характерным окраскам самих веществ в видимом и фильтрованном ультрафиолетовом свете до и после проявления различными хромогенными реагентами. Обнаружение флавоноидов на хроматограммах проводят:

• по окраске пятен в видимом свете (антоцианы);

• по характеру свечения в УФ-свете: флавоны, флавонол-3-О-гликозиды, флаваноны и халконы обнаруживаются в виде темно-коричневых пятен, флавонолы и их 7-О-гликозиды – в виде желтых или желто-зеленых;

• по характеру свечения в УФ-свете после проявления 5%-ным спиртовым раствором хлорида алюминия и последующего прогревания хроматограммы при 105°С в течение 2-3 мин, наблюдают пятна флавоноидов с интенсивной желтой и желто-зеленой флуоресценцией [2].

Количественное определение.

Для количественного определения флавоноидов в растительном сырье наибольшее распространение получили физико-химические методы, прежде всего фотоколориметрия и спектрофотометрия.

Перейти на страницу:
1 2

 


Copyright © 2013 - SimpleBiology.ru - Все права защищены